Temperatura de fusión de un cebador (regla de Wallace)
Calculadora
Resultados
- Temperatura de fusión Tm (°C)
- 62
- Longitud del cebador (nucleótidos)
- 20
- Contenido de GC (%)
- 55
- Temperatura de hibridación sugerida (°C)
- 57
Resultados de biología y laboratorio
| Temperatura de fusión Tm (°C) | 62 |
| Longitud del cebador (nucleótidos) | 20 |
| Contenido de GC (%) | 55 |
| Temperatura de hibridación sugerida (°C) | 57 |
Diagrama formula-map
- Temperatura de fusión Tm (°C)
- 62
- Longitud del cebador (nucleótidos)
- 20
- Contenido de GC (%)
- 55
- Temperatura de hibridación sugerida (°C)
- 57
Desglose de la fórmula
Fórmula
Tm = 2 × (A + T) + 4 × (G + C) (Wallace rule, short primers)= 62
Nota
Modelo simplificado: estos resultados usan las relaciones de laboratorio estándar y constantes promedio (A260 = 1 para 50 µg/mL de ADN bicatenario, 617,96 g/mol por par de bases, ~110 Da por aminoácido, crecimiento exponencial ideal). Las muestras reales varían según la pureza, los contaminantes, el tampón, la temperatura y la calibración del instrumento. Verifique siempre con sus propios estándares y protocolo; no lo use con fines diagnósticos ni críticos para la seguridad.
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¿Qué calcula la regla de Wallace?+
La regla de Wallace da una estimación rápida de la temperatura de fusión (Tm) de un cebador con la fórmula Tm = 4°C x (número de G+C) + 2°C x (número de A+T), basada en la idea de que los pares G-C (tres enlaces de hidrógeno) aportan más estabilidad térmica que los pares A-T (dos enlaces de hidrógeno).
¿Qué tan precisa es la regla de Wallace comparada con otros métodos de cálculo de Tm?+
Es una aproximación rápida más adecuada para cebadores cortos, entre 14 y 20 bases aproximadamente; para cebadores más largos o mayor precisión, los métodos termodinámicos de vecinos próximos tienen en cuenta el contexto específico de la secuencia y la concentración de sal, y se consideran más fiables.
¿Por qué dos cebadores con el mismo contenido de GC dan el mismo Tm aquí?+
La regla de Wallace solo cuenta cuántas bases G/C y A/T hay, no su orden a lo largo de la secuencia, así que dos cebadores de la misma longitud y misma composición de bases siempre devolverán un Tm idéntico con este método, aunque los métodos de vecinos próximos sí los distinguirían.
¿Afecta la concentración de sal al resultado?+
La regla de Wallace básica no incluye un término de corrección por sal, a diferencia de los cálculos de vecinos próximos; asume implícitamente condiciones salinas estándar de PCR, por lo que será menos precisa para reacciones con concentraciones inusuales de cationes monovalentes o divalentes.
¿Qué diferencia de Tm entre un par de cebadores se considera aceptable para la PCR?+
La mayoría de los protocolos recomiendan mantener el Tm de los cebadores directo e inverso dentro de aproximadamente 1-2°C entre sí para que ambos se hibriden eficazmente a la misma temperatura de alineamiento; una diferencia mayor puede sesgar la amplificación hacia el cebador con el Tm más alto.