Concentración de proteína por A280
Calculadora
Resultados
- Concentración (mg/mL)
- 6.371814
- Concentración (µg/mL)
- 6,371.814092
- Proteína total recuperada (mg)
- 3.185907
Resultados de biología y laboratorio
| Concentración (mg/mL) | 6.371814 |
| Concentración (µg/mL) | 6,371.814092 |
| Proteína total recuperada (mg) | 3.185907 |
Diagrama formula-map
- Concentración (mg/mL)
- 6.371814
- Concentración (µg/mL)
- 6,371.814092
- Proteína total recuperada (mg)
- 3.185907
Desglose de la fórmula
Fórmula
C (mg/mL) = A280 × dilution ÷ ε(0.1 %)= 6.3718140929535
Nota
Modelo simplificado: estos resultados usan las relaciones de laboratorio estándar y constantes promedio (A260 = 1 para 50 µg/mL de ADN bicatenario, 617,96 g/mol por par de bases, ~110 Da por aminoácido, crecimiento exponencial ideal). Las muestras reales varían según la pureza, los contaminantes, el tampón, la temperatura y la calibración del instrumento. Verifique siempre con sus propios estándares y protocolo; no lo use con fines diagnósticos ni críticos para la seguridad.
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¿Por qué se usa 280 nm para medir la concentración de proteína?+
Los aminoácidos aromáticos, principalmente triptófano y tirosina, junto con los puentes disulfuro de cistina, absorben fuertemente la luz ultravioleta cerca de 280 nm, así que la absorbancia a esa longitud de onda varía según cuántos de estos residuos estén presentes en la muestra.
¿Cómo convierte la calculadora la absorbancia en concentración?+
Aplica la ley de Beer-Lambert, concentración = A280 / (coeficiente de extinción x paso óptico), usando el coeficiente de extinción molar o porcentual de la proteína que tú proporcionas, ya que ese coeficiente varía de una proteína a otra según su contenido de residuos aromáticos.
¿Por qué necesito conocer el coeficiente de extinción específico de mi proteína?+
Como el contenido de triptófano, tirosina y cistina difiere entre proteínas, un factor de conversión genérico (a diferencia del caso del ADN con A260) no es preciso; usar un coeficiente calculado a partir de la secuencia real de tu proteína, o determinado experimentalmente, da una concentración mucho más fiable.
¿Se puede usar este método para una mezcla de varias proteínas?+
No de forma fiable para una concentración absoluta, ya que una mezcla no tiene un único coeficiente de extinción; el A280 para una muestra mixta (como un lisado crudo) se usa mejor como medida relativa de proteína total, o combinado con un ensayo colorimétrico como Bradford o BCA para obtener un valor absoluto.
¿Qué puede hacer que el A280 sobreestime la concentración de proteína?+
Los contaminantes que también absorben cerca de 280 nm, especialmente los ácidos nucleicos residuales, inflan la lectura; una relación A260/A280 elevada es señal de esta contaminación, y debe usarse una fórmula de corrección por ácidos nucleicos o una preparación más limpia si esa relación está elevada.